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大鼠5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒
酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immune sorbent assay, ELISA)是Engvall和Van weemen于1971年提出的。该法是以固相载体吸附技术和免疫酶技术相结合树立的一种检测办法,操作简便,无需特别装备,并存在高度的敏理性和正确性,所以受到大家的广泛器重,以至在较短时光内,于海内外均获得了较快的进展。
人脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒 Human brain natriuretic peptide,BNP ELISA Kit 96T/48T
人细胞角蛋白20(CK20)ELISA试剂盒 Human cytokeratin 20,CK20 ELISA Kit 96T/48T
人N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒 Human N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP ELISA Kit 96T/48T
大鼠5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒人细胞角蛋白13(CK-13)ELISA试剂盒 Human cytokeratin 13,CK-13 ELISA Kit 96T/48T
人细胞角蛋白17(CK17)ELISA试剂盒 Human cytokeratin 17,CK-17 ELISA Kit 96T/48T
(一) 重要的技术类型 ELISA的技术类型良多,但以检测抗体的间接法,及测定抗原的双抗体夹心法最常用,现将其操作流程分辨简介如下。
1. 间接法首先将已知标准抗原吸附在聚苯乙烯塑料反应板的相应孔中,而后加入被检血清,在温箱中作用必定时间,使构成的抗原?抗体复合物平均地附着在固相载体上,再滴加用辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗免疫球蛋白,则与固相载体上的抗原?抗体复合物的抗体结合,当加入底物溶液时,H2O2在酶的催化下氧化,同时使无色的显色剂邻苯二胺(OPD)脱氢氧化 勞力士2012新款手錶,造成可溶性的氧化型棕色联苯胺,产生的颜色强度的差异,可用肉眼或特制的72型分光光度计检测,由此推算出被检血清中是否有相应抗体,以及含量的多少。
2. 双抗体夹心法首先将已知抗体球蛋白吸附在载体上,致敏后,冲刷除去过剩抗体,滴加被测抗原,致敏后,冲去多余抗原,滴加酶标抗体,室温下致敏后,冲洗除去过剩的标志抗体,加入底物溶液显色后,再参加终止剂,以终止反应的进行,最后依据反响孔中色彩的深浅,对被检抗原作出检定。
(二) 在微生物检测方面的运用 ELISA技巧问世以来,已广泛用于各种病原微生物,如病毒、细菌、真菌、支原体、破克次氏体、衣原体、螺旋体等及其抗体的检测,在微生物检测跟疾病诊断方面施展了主要作用 prada官方代購網,通过试剂和检测方式的标准化,组装的ELISA诊断试剂盒,已在临床上得到了普遍的利用。
(三) ELISA的特色 敏锐度高,检测才能可达10-6mg/ml程度;应用范畴广,既能检测抗原又能检测抗体,既能定性又能定量;有效期长,酶标抗体于一般冰箱中可保留一年以上,效价不降落,制成的标本,可久长保存,供随时复查用。
[附]:免疫酶染色法(组化法) 该法的原理与免疫荧光法类似,不同之处在于用酶标记的抗体,称酶标抗体。酶标抗体与抗原发生特异性联合,当加入酶的底物时,底物在酶的催化下,发生组织化学反应,发生有色物资,该物质不需特殊仪器,在光学显微镜下即能察看,目前常用的酶是HRP,底物为DAB,可天生棕褐色积淀物,使玻片组织标本上的抗原所在部位浮现颜色。各品种型ELISA测定时个别需经由以下步骤:固相包被→加待测样品→温育→洗涤+加酶标物→温育→洗涤→加底物→温育一加终止液→比色→断定成果。ELISA操作较复杂,操作不当将引起较大的误差。在操作中应留神以下5个方面。
1.跟着病情的进展或由其余因素影响,某些抗体在机体内的含量产生大幅稳定,因而有必要对标本进行预处置,例如对血清标本作恰当稀释,或离心分别血脂等。间接法测定中,标本适当稀释还可下降非特异性反映。
2.加样普通应用加液器 lv2013夢幻新款目錄,在ELISA中正常有4次加样:加标本、加酶结合物、加底物和加终止液。加标本时必需每份标本使用一支移液器吸嘴,免得穿插传染。加酶结合物、底物和终止液时则不需调换吸嘴。
3.在成批手工检测中,还应注意操作时差的影响。加样及混匀时间的差别,使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致,对竞争法及定量检测影响很大,不注意可能会导致过错结果或定量不准。
4.洗涤是ELISA操作进程中决议试验成败的一个要害步骤。目标是除去未结合的免疫反应物 burberry官方網,终止抗原抗体反应,除去标本中与反应无关的成分、游离的酶标物以及反应过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。可用洗板机洗板或手工洗板,前者洗涤品质较好,各反应孔洗涤效果均一,批内、批间差异小,手工洗板应注意把持各孔洗涤后果,差异不宜太大。
5.精确判断结果须使用ELISA测读仪(酶标仪),比色法判读可抉择单波长或双波长,根据反应液颜色的不同选用不同波长的滤光片,以空缺孔校零测定反应孔的吸光度值(A值)。酶标仪具备良好的反复性。
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